What！一台相机就可以得到超分辨图像？

2022-10-22 12:37:08 山汉

在“*分辨”的价值已被广泛认同的当下，

是什么阻碍了这一利器被生命科学研究者真正的使用？

复杂无比的标记手段让您无所适从？
*大功率的激光让您有所顾忌？
活细胞的动态研究，传统*分辨的速度无法达到要求？
过于高昂的价格让您望而却步？

以上这些都将随着Andor SRRF-Stream的推出成为历史！

只要您拥有一台常规荧光显微镜，只要您知道怎么做常规荧光成像实验，您就可以很方便的把现有分辨率提升2 - 6倍，达到50 - 150 nm*终分辨率。

SRRF-Stream特性和优势

实时—优化的工作流程，采集处理同时进行，避免后续再处理过程。
*分辨— 提升2 - 6倍(50 - 150nm*终分辨率)。
低激发光强度(mW-W/cm2) — 获得更长的活细胞观察时间和更精确的生理机能。
使用传统的荧光染料，如GFP — 简单标记，无光控转换要求。
活细胞动力学– 每1-2秒全视野成像，更小视野能轻易实现*过10FPS*分辨成像速度。
*高性价比 – 升级传统荧光显微镜（宽场、全内反射(TIRF)、转盘式共聚焦）到*分辨显微镜

SRRF-Stream应用

提供亚细胞器水平的蛋白结构分析
追踪细胞内单分子，使用实时追踪技术了解特殊单分子结构对细胞生理机能的影响
涉及单个SNARE蛋白结构的膜融合过程
突触囊泡的动态变化，通过突触可塑性和学习性进行树突棘改造
信号转导及胞间通讯和分化
包括表达和抑制在内的DNA重构
细胞骨架重组——肌动蛋白纤维运动

SRRF-Stream 分辨率提升实例

奥林巴斯显微镜

图1-图像比较了荧光标记的BPAE细胞，由宽场荧光显微镜和使用SRRF-Stream模块的iXon Life 888 EMCCD相机记录。使用63X物镜、2X光学放大、560nm照明。100幅原始“输入”图像被记录为每一幅合成的*分辨图像，使得单幅*分辨成像速率为0.5HZ。相同条件对比未使用SRRF-Stream模块，100幅标准宽场图像被记录然后取平均。原始图像是一幅更大视野的细胞图像，图中是显示了一个被放大的细胞，为了更容易地通过一个小区域显示线强度剖面对比。从图像中可以显而易见的发现分辨能力的大幅改善。

奥林巴斯显微镜

图2- 比对荧光标记U2OS细胞系*由Andor Dragonfly高速共聚焦显微镜和使用SRRF-Stream模块的iXon Life 888 EMCCD相机记录。使用63X物镜、2X光学放大、488nm照明。*的*分辨能力使得观察到的有丝分裂纺锤体的精细程度大幅提升。通过这个区域的比较线强度剖面图被进一步证明。

*U2OS细胞系被固定，用抗α-微管蛋白一抗（绿色，AF488）和鬼笔环肽（红色，罗丹明）染色来显现肌动蛋白，DAPI染色呈现细胞核。标本由Klebanovych A., Laboratory of Biology of Cytoskeleton, IMG of the AS CR, v.v.i.提供。

奥林巴斯显微镜

图3-丙肝病毒侵染抗NS5A染色的细胞。比较宽场，结构照明*分辨成像（SIM）和SRRF成像（SRRF宽场成像）。图像由相同的细胞区域，由同一台显微镜记录，用完全相同的物镜和光路。唯一不同的是SIM由一台6.5um像素的sCMOS记录而宽场和SRRF*分辨由一台16um像素的iXon EMCCD记录。SRRF出众的分辨能力显而易见，可轻松提升比传统的衍射极限2倍以上的分辨率，而SIM理论上受限于设计原理，只能达到低于2倍的传统衍射极限分辨率提升。标本由UCL的Grove实验室提供。