奥林巴斯暗场显微镜对中调节

2019-02-22 10:24:54 Pooher Inc. 132

以下部分回顾了低倍和高倍透射暗场照明的显微镜配置和对准步骤。

低放大率透射暗场显微镜配置

  • 选择适合高对比度染色的标本并放置在显微镜台上进行观察和显微镜标定。选择10倍物镜并使样品在明场照明下进行清晰对焦。

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  • 仔细对准显微镜的光学元件,并使用透射光显微镜下科勒照明设置部分中概述的步骤调整光源和光阑以获得适当的科勒照明

  • 在继续操作之前,请将现场和聚光镜光圈光圈膜片都打开至全开位置。这允许冷凝器在其最大数值孔径下运行。选择合适的中央不透明光圈(通常约10-18倍物镜的直径约为16-18毫米),然后将其放在蜘蛛,玻璃或醋酸纤维停止架上。接下来,将止动器组件插入显微镜的光路中,方法是将其滑入冷凝器过滤器支架中,或将其固定在冷凝器下侧的位置。

  • 如果要使用专门为低放大倍数的暗场照明设计的聚光镜,请将其插入显微镜配置此点的聚光镜安装座中。

  • 通过向下窥视目镜筒或插入相位望远镜(或伯特兰透镜),取下目镜并观察物镜的后焦平面。在中央不透明光阑处部分遮挡的光线通常会在物镜后焦平面看到。理想情况下,中心光圈直径应略大于光盘,并将其完全遮罩。如果不是这种情况,请使用底座对中螺钉将冷凝器对中,以使光盘完全被中央挡块遮盖。

  • 更换目镜并将适合在暗视野照明下观察的舞台上的低对比度样品放置。标本的图像在非常黑暗的背景下应该是明亮的,唯一的文物是显微镜载玻片上的小颗粒灰尘和污迹。如果图像太暗,请将钨卤素光源的电压提高到最大电压。

  • 聚焦聚光镜是最后一步,应特别注意,特别是使用20倍以上放大倍数的物镜时。冷凝器的顶部透镜(当使用“干燥”时)应该几乎与显微镜载玻片的下侧接触。当冷凝器在机架中的位置太低时,在视场中明显环绕的黑暗中心区域是明显的。这可以通过升高冷凝器来解决,直到在视野的中央部分完全照亮小直径的明亮圆形区域。

  • 显微镜现在准备在低放大率的暗场照明下进行样品的观察和显微摄影。

高放大率透射暗场显微镜配置

  • 以类似于低功率暗场显微镜配置的方式,将染色的样品置于载物台上并使用10倍物镜,将显微镜对准科勒照明,如我们的透射光显微镜部分所述

  • 使用冷凝器机架旋钮降下并移除明场冷凝器。将反射光高数值孔径电容器插入支架,并用固定螺丝固定。缓慢升高冷凝器,直到距离载玻片下侧小于2毫米。

  • 选择一个暗场样品并将其放置在物镜和冷凝器之间的显微镜台上。冷凝器会将明亮的光环投射到可用于对准光路的样品上。使用聚光镜平移对中螺丝将光环移动到视野的中心。

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  • 将高数值孔径暗场聚光器对中时,使用低功率10倍物镜通常是有利的。当观察具有10倍物镜的样品时,缓慢地升高和降低聚光镜,一个点将会出现在视场中的亮点,如图2(a)所示。当冷凝器略微升高或降低时,如果冷凝器正确居中,将出现类似于图2(b)所示的黑点。在冷凝器没有正确对准和居中的情况下,典型的视场可能如图2(c)所示,并且如果显微镜没有适当调整柯勒照明,视场可能会像在图中看起来一样图2(d)。图2(a)说明了冷凝器的理想和正确定位,

  • 高数值孔径暗场冷凝器被设计为在冷凝器顶部透镜和显微镜载玻片底部之间使用“干燥”或浸没油。要将油涂抹到浸没式冷凝器上,请取下显微镜载玻片,并慢慢将冷凝器放在机械工作台下方,并将一滴油直接放在前镜头上。更换滑块,然后缓慢升高冷凝器,直到油滴与滑块底部表面接触。仔细观察油接触面积,以确定是否有任何气泡进入冷凝器顶部透镜和显微镜载玻片之间的空间。应该注意的是,无论目标的放大倍数如何,如果使用无油冷凝器,则光不会从冷凝器中出现。

  • 气泡会散射光线,应该通过移除目镜并用相位望远镜或伯特兰透镜观察物镜的后焦平面来观察。如果没有气泡,请继续下一步。检测到气泡时,请从滑板和聚光镜顶部镜头上取下所有油迹,然后重复此过程。在重新注入冷凝器之前,确保两个表面清洁并且完全没有油,灰尘,污垢和其他污染物。

  • 选择用于观察样品的物镜并将其摆动到冷凝器上方的位置。如果物镜设计为干燥使用,则通过调节聚光镜聚焦旋钮对试样进行对焦并优化照明。使用油浸式物镜时,请在物镜的前镜头上放一滴油,然后将其摆动到位。将物镜缓慢移动到位,并仔细观察物镜前透镜和显微镜载玻片之间的油接触面积。应该发生明亮的闪光(来自散射光),物镜前镜头上的即时油与显微镜载玻片接触。

  • 用相位望远镜或伯特兰透镜观察物镜的后焦平面检查气泡。如果存在气泡,请将物镜摆动到显微镜鼻镜上的下一个定位挡块,然后用一块不起毛的镜头纸擦掉多余的油。将油重新涂抹在物镜前镜头上,然后重试。当油接触区域没有气泡时,请使用聚光镜架聚焦旋钮优化暗场照明。

  • 如果物镜有一个设计用于调整数值孔径的内部光圈,则应该在此时进行调整(这仅适用于数值孔径高于1.20的油浸物镜)。取下目镜并将相位望远镜放入眼管或使用伯特兰透镜观察物镜的后焦平面。如果在中央黑暗区域周围看到明亮的光环,物镜的光圈太大,必须使用内部光圈选择减小光圈,或选择较小数值孔径的物镜。调整光圈,直到光环离开视场。如果观察到月牙形弧光,则冷凝器没有正确对准显微镜光轴的中心。

  • 更换目镜并聚焦试样,现在应该在黑暗的背景下明亮并均匀地照亮。当选择另一个物镜时,重复上述步骤将冷凝器和物镜对准,以获得最佳的暗场显微镜。

无论照明模式是明场,暗场,相位对比还是某种其他对比度增强技术,都应始终注意显微镜对准。在这项工作中花费的时间将在显微镜的卓越性能中得到补偿,无论是常规观察还是关键数字成像或显微摄影术。


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