CellSens standard软件主要功能操作说明

2018-08-17 16:52:55 普赫 1639

一、明场实时图像调节及拍照保存

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1.打开cellSens软件后,首先在摄像控制工具窗口中切换相机芯片为“彩色模式”,此时相机自动切换为彩色芯片进行明场图像采图;接下来点击“实时观察”对样品进行预览,随后在摄像控制工具窗口中将曝光模式调节为“自动”,最后将曝光模式调节到“手动”,通过增加或减少曝光时间来获得满意的观察效果;

 

2.如果明场图像背景不够干净,可以在摄像控制工具窗口中执行白平衡操作,点击“白平衡”后框选预览图像中样品之外的背景区域,即可执行白平衡;

 

3.根据实验需求,调节拍照的分辨率后点击“拍照”即可完成对当前预览图像的及时拍照,对该图像另存到指定文件夹,图像默认保存格式为“TIF”格式。


二、荧光实时图像调节及拍照保存

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1.打开软件后,首先在摄像控制工具窗口中切换相机芯片为“灰度模式”,此时相机自动切换为黑白芯片进行荧光图像采图;接下来勾选高级荧光模式“SFL”;

 

2.随后点击“实时观察”对荧光图像进行预览,并在软件上方的工具栏中选择合适的荧光观测模式(如DAPI、FITC),将曝光模式调节为“自动”,根据荧光表达的强弱,可以将曝光模式切换到“自动”,通过增加曝光时间来使得荧光表达更亮,反之亦然;若调节曝光时间超过1s,可以适当调高“增益”值(默认是1,可以调节到2)来使得更短的曝光时间达到相同的荧光亮度;

 

*1、如果觉得荧光样品的背景不够干净,可以执行黑平衡操作,点击“黑平衡”后框选预览图像中荧光样品之外的背景区域,即可执行黑平衡;

 

*2、根据实验需求,调节拍照的分辨率后点击“拍照”即可完成对当前预览图像的及时拍照,对该图像另存到指定文件夹,图像默认保存格式为“TIF”格式

 

奥林巴斯显微镜多通道图像:用黑白相机芯片+自定义荧光观测模式所拍出的荧光图像,该图像在软件中已默认添加并使用了相应通道的伪彩色,此时图像模式为“多通道,16 位图像”。


三、多通道荧光自动叠加(CS-ST+ MA)

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1. 将工具窗口切换至“流程管理”工具窗口;

2. 选定“自动处理”选项;

3. 单击“多通道”按钮奥林巴斯显微镜按钮将显示为已点击状态,此时该按钮内部的充实浅黄色的背景;

4. 单击添加通道按钮 奥林巴斯显微镜上下文菜单随即被打开;该上下文菜单中将列出所有当前软件设置的观测模式(DAPI、FITC、CY3、CY5等荧光观测模式);

5. 选定首先要采集的色彩通道,例如蓝色“FUW”,随后单击第一个色彩通道旁边的小加号,激活当前蓝色通道,并按软件提示将滤色块转盘切换至1号位;

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6. 随后将工具窗口切换至“摄像控制”工具窗口,点击“实时观察”对荧光样品进行曝光时间及增益值进行调节,达到一个最佳的观察效果;然后切换至“流程管理”工具窗口,单击读取设置按钮,将最佳观察效果时的曝光时间及增益值读取到当前所激活的荧光通道;

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7.后面可以重复操作第4-6步,添加想要与当前已激活通道(例:蓝色通道)组合的其他荧光通道;

8.在流程管理工具窗口中,单击开始按钮奥林巴斯显微镜随后软件中的提示依次切换不同的荧光滤色块,每次切换相机都会自动拍一张荧光图像,待指定多通道组合中的滤色块转盘切换完成后,软件自动将不同通道下拍摄的多张荧光图像进行荧光叠加,图像窗口中将显示所有通道的叠加荧光图像;

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9.将多通道荧光图像另存为指定文件夹,默认的文件保存格式为“TIF”格式,此为原图保存;

10.如果需要将单个通道下的荧光图像保存,点击“平铺”按钮后,将鼠标放置在需要保存的单个荧光通道图像上,鼠标右键点击“抽取”,软件会将该通道的荧光图像单独抽取出来;此时点击“图像”>“印入信息”>并选择“”之后再对该荧光图像进行保存,即可得到一张包含伪彩信息的荧光图像,图像格式建议为“TIF”格式。


四、标尺信息显示及保存

如果要在软件中上显示并保存标尺信息,可在进行图像预览时点击“视图”>“标尺”,标尺就会在图像上显示出来;随后点击“拍照”,拍照完成后,再点击“图像”>“印入信息”>并选择“”之后再对该图像进行保存,标尺信息就会印在该图像上。


五、手动大图拼接(CS-ST+MPC)

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1. 将工具窗口切换至“流程管理”工具窗口;

2. 选定“手动处理”选项;

3.单击“手动图像拼接”按钮奥林巴斯显微镜按钮将显示为已点击状态,此时该按钮内部的充实浅黄色的背景;

4.请确定“自动对齐”按钮显示为已点击状态。该按钮应该显示为奥林巴斯显微镜

5.在流程管理工具窗口中,单击开始按钮奥林巴斯显微镜软件将切换到实时观察模式,对样品聚焦清楚后,可以移动载物台使得从样品的左上角出现在视野里;

6.接下里单击某个箭头按钮可设置要将下一幅图像排列在当前图像的哪一侧,当你点击奥林巴斯显微镜箭头时,软件会自动采集当前的样品图像出现出现在图像窗口里,而该采集图像右侧会出现当前的实时图像,通过移动载物台使得实时图像中样品的右上角部分与采集好左上角的图像重合;随后点击奥林巴斯显微镜箭头时,当前样品左右两部分重合好的图像会被采集,随后在该采集图像下方会出现当前的实时图像,通过移动载物台使得实时图像中样品到右下角部分和采集好的图像重合;依次反复,直至一个完整的样品被完全拼出;

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7.将已拼接好的的图像另存为指定文件夹,默认的文件保存格式为 “VSI”格式。

 

六、手动景深扩展(CS-ST+MPC)

1. 将工具窗口切换至“流程管理”工具窗口;

2. 选定“手动处理”选项;

3. 单击“即时扩展景深”按钮奥林巴斯显微镜按钮将显示为已点击状态,此时该按钮内部的充实浅黄色的背景;

4. 明场图像做景深扩展时选择透射(指数/二次函数),荧光图像做景深扩展时选择反射(指数/二次函数);

5.在流程管理工具窗口中,单击开始按钮奥林巴斯显微镜此时图像窗口下方右侧画面即为当前的样品焦面的实时图像,而图像窗口下方左侧画面显示即为当前焦面上的样品信息,缓慢微调过程中,依次达到样品不同的焦面,等使用微调机构从样品的下焦面走到上焦面后,图像窗口下方左侧画面里会把不同焦面上所有的样品信息完全累积记录;而在图像窗口上方会自动生成一张把不同焦面样品信息叠加后的图片,随后单击停止按钮奥林巴斯显微镜图像窗口会生成一张叠加好全部清晰的图片;点击文件> 另存为命令保存新的图像。保存图像时,请始终使用TIF 或VSI 文件格式。


七、时间间隔拍照

1. 激活流程管理工具窗口;

2. 选定“自动处理”选项;

3. 单击“缩时”按钮奥林巴斯显微镜按钮将显示为已点击状态,此时该按钮内部的充实浅黄色的背景;

4. 指定完成采集所需的时间,如 10 秒。在录制时间字段中输入值“00000:00:10”(即 10 秒)。你可以在该字段中直接编辑每个数字。为此,只需在要编辑

的数字前单击一下;

5. 选择数据段右侧的单选按钮,以将采集时间指定为不再更改。奥林巴斯显微镜锁形图标会自动出现在所选单选按钮旁;

6. 指定您要采集的帧数。在周期数字段中输入,例如 10,随即会更新间隔字段。它表示两个连续帧之间经过的时间;

7. 在流程管理工具窗口中,单击开始按钮奥林巴斯显微镜随即会立即开始采集时间序列;

8. 随后启动流程按钮会变为暂停按钮,单击此按钮将中断采集流程;

· 停止按钮将变为激活状态,单击此按钮将停止采集流程,到此时为止所采集的时间栈图像将得到保留;

· 在图像窗口左下部的状态栏中将出现进度条,它会告诉你还需要采集多少幅图像;

9. 当你在流程管理工具窗口中再次看见开始按钮,同时进度条消失时,即表示采集已完成;将时间序列成像另存为指定文件夹,预设的文件保存格式为 “VSI”格式。


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